内参抗体
在Western Blot实验中，可能存在总蛋白浓度测定不准确，或者蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的操作误差；这些误差可以通过测定每个样品中实际转到膜上的内参含量来进行校正。
内部参照即选取相同样本中某个内源表达的蛋白作为参照。通常会选择由管家基因编码的蛋白(Housekeeping Proteins)作为内参，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化可以作为一个稳定的参照物(比如GAPDH、β-Actin等)。
在WB实验中，蛋白的表达情况是通过与抗体的结合而体现的，也就是说内参蛋白的选择问题等同于内参抗体的选择问题。点击了解产品
如何选择内参抗体
一、样本种属来源
选择内参首先要考虑的就是实验样本来源于什么物种，哺乳动物的组织或者细胞样本，通常选择β-actin、GAPDH、β-tubulin等。
二、目的蛋白分子量
选择内参抗体时，应该考虑目的蛋白分子量的大小。通常目的蛋白与内参蛋白分子量应该相差5KD以上。比如目的蛋白分子量为45KD，不适宜选择β-actin(42KD)作为内参，可以考虑选择GAPDH(36KD)作为内参。
三、目的蛋白表达部位
首先需要进行亚细胞定位，再确定目的蛋白的组织表达部位，一般的蛋白检测常用，β-actin，GAPDH等。
β-Actin抗体
beta Actin(肌动蛋白，细胞骨架蛋白)，375个氨基酸组成，分子量大小为42-43kDa左右。它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。beta Actin 作为内参是得到公认的，针对大多数组织和细胞来说，它广泛分布于细胞质内，表达量非常丰富。但是在一些少量特殊的情况下比如脂肪组织和细胞内，beta Actin 的表达量就很少。
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名称：Anti-β-Actin mIgG2a Antibody
货号：GM-77430AB
规格：10 μg/100 μg/1 mg
吉满优势
1.高亲和力，高特异性，批次间稳定
2.WB建议稀释比例：1:1000-1:5000
3.适用种属包括Human,Chinese hamster,Mouse,Dog和Rat等
数据展示
用HEK-293、Hepal-6、PC12、CHO-K1、MDCK细胞进行WB验证分析，上样后120 V进行电泳，300 mA、1.5h进行转膜，转膜结束后用5%脱脂奶粉封闭两小时，使用actin抗体(Catalog#GM-77430AB)(1:1000稀释)，在摇床上4℃孵育过夜，用1×TBST清洗三次后添加二抗，摇床室温孵育2-3 h，用1×TBST清洗三次后进行显影。
GAPDH抗体
GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)，是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。
GAPDH基因几乎在所有组织细胞中都高水平表达，在同种细胞或组织中的表达量一般是恒定的，且很少受外部诱导物的影响，广泛用作WB蛋白质标准化的内参。但比如缺氧和糖尿病等疾病存在下，会增加 GAPDH 在特定细胞和组织中的表达。
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名称：Anti-GAPDH mIgG2a Antibody
货号：GM-77904AB
规格：10 μg/100 μg/1 mg
吉满优势
1.效价高，质量稳定
2.WB建议稀释比例：1:1000-1:5000
3.适用种属包括Human, Mouse, Dog, Rat, Pig
数据展示
用HEK-293,Jurkat,PC12,WSL,Hepal-6和MDCK 细胞进行WB验证分析。上样后，在120V下电泳，然后在 300mA下转膜1.5小时。转膜后，细胞用 5%脱脂奶粉封闭两小时。使用GAPDH抗体(Catalog#GM-77904AB)(1:1000 稀释度)，4℃摇床孵育过夜，加入二抗前用1×TBST 冲洗三次，室温摇床孵育2-3 小时，显像前用1×TBST 冲洗三次。
两种内参的区别
Actin是结构蛋白，不同组织的细胞结构会有差异性，表达量也可能会不一样。
GAPDH是代谢类蛋白，在活组织中表达比较稳定。但是做诱导后样本或检测磷酸化等修饰性抗体时，GAPDH表达量有可能会受到诱导处理的影响。
