背景介绍
报告基因是一类使表达产物易于被检测的基因,其作用原理是将报告基因的编码序列及其表达调控序列与目的基因融合形成嵌合基因,在调控序列的作用下进行表达,通过对报告基因表达产物的检测来评价目的基因的表达状况。常见的报告基因包括萤光素酶(Luciferase)、氯霉素乙酰转移酶(CAT)、β-半乳糖苷酶(β-gal)、分泌性人胎盘碱性磷酸酶(SEAP)和绿色荧光蛋白(GFP)等。
萤火虫萤光素酶
萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase)是一种分子量约为61kDa的蛋白,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,能够催化萤光素(luciferin)氧化成oxyluciferin,在氧化的过程中会发出波长为560nm左右的生物荧光。由于特异性强、灵敏度高、内源性低、检测不受细胞内其他物质的影响等优点,萤光素酶被作为报告基因(标记蛋白)而被广泛应用。
(荧光虫荧光素酶检测原理图)
产品一览
一、GMOne-Step荧光素酶报告基因检测试剂盒
吉满生物自主研发的GMOne-Step™荧光素酶报告基因检测试剂盒(GMOne-Step Luciferase Reporter Gene Assay Kit,简称GMOne-Step) 操作简便,实验前无需对细胞进行清洗或收集,可直接使用,省去了混合试剂的步骤,节省了实验时间。本试剂盒在发光值与稳定性之间做到了相对平衡。使得实验结果准确可靠。具有操作简单、灵敏度高、稳定性好的优势!点击了解产品
货号 | 规格 |
GM-040503A | 100T |
GM-040503B | 100T*10 |
GM-040503C | 1000T |
GMOne-Step荧光素酶报告基因检测试剂盒产品清单
产品应用
适用于基于报告基因的生物活性检测,例如:Fc效应检测、T细胞激活检测、免疫检查点检测、细胞因子、生长因子检测等。
*吉满生物依托特有的荧光素酶报告基因系统,并基于药物的作用机制(MOA),构建了一系列萤火虫荧光素酶报告基因细胞系产品,覆盖大部分具有功能活性的靶点,联合使用该试剂,能更加有效地帮助研究人员对小分子药物、单抗、双特异性抗体等药物体外生物学活性评价。
数据展示
图注:吉满生物GMOne-Step和竞品公司P、竞品公司1、竞品公司2的化学发光稳定性的对比图。如图所示GMOne-Step拥有更好的稳定性,在前20min内荧光衰减不超过5%
图注:吉满生物GMOne-Step拥有良好的孔间稳定性(±3%左右)
图注:吉满生物GMOne-Step具有良好的线性关系
二、双荧光素酶(Dual Luciferase)报告基因检测试剂盒
双萤光素酶报告基因检测系统在单萤光素酶报告基因的基础上引入了“内参对照”报告基因,这样可以在最大程度上减小细胞数目、细胞生长状态和转染效率等外在因素对于实验的影响,使得实验结果更为可信。
为什么采用双荧光素酶报告系统?
单报告基因实验往往会受到各种实验条件的影响,而双报告基因则通过共转染的“对照”为实验提供一基准线,从而可以在最大程度上减小细胞活性和转染效率等外在因素对实验的影响,使得数据结果更为可信。一般情况下,海肾荧光素酶基因作为内参使用,将两个报告基因构建到同一个质粒上,分别用不同的启动子启动其表达。这样就可以减少内在变化因素对实验准确性的影响,相当于做了标准化,使测试结果不受实验条件变化的干扰。计算结果时,将萤火虫荧光素酶的检测值除以海肾荧光素酶检测值(Firefly luciferase/Renilla luciferase)即可。
(海肾荧光素酶检测原理图)
货号 | 规格 |
GM-040502A | 100次 |
双荧光素酶(Dual Luciferase)报告基因检测试剂盒
产品特点
快捷简便、灵敏度高、安全可靠、稳定准确
产品应用
启动子研究:启动子结构分析、启动子SNP分析
转录调控研究
信号通路研究
microRNA研究:验证microRNA同mRNA/lncRNA/circRNA靶向互作
三、D-荧光素钠盐,D-荧光素钾盐,D-荧光素(游离酸)
D-荧光素(D-Luciferin)是荧光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍用于整个生物技术领域,特别是体内活体成像技术。作用原理是荧光素酶在Mg2+和O2参与下催化荧光素氧化成oxyluciferin,在荧光素的氧化过程中,发出生物荧光(bioluminomescence)。当荧光素过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性,可以通过化学发光仪或液闪测定仪测定生物荧光。
产品名称 | 货号 | 规格 |
D-Luciferin, Sodium Salt D 荧光素钠盐 | GM-040611 | 1g/5g/100mg/500mg |
D-Luciferin, Potassium Salt D 荧光素钾盐 | GM-040621 | 1g/5g/100mg/500mg |
D-Luciferin Firefly,free acid | GM-040601 | 1g/100mg/500mg |
D-荧光素产品列表
产品区别
D-荧光素钠盐的溶解度略高于钾盐,但是钾盐的稳定性略高于钠盐。这是因为钠离子对荧光素酶的活性有一定的抑制作用,而钾离子则没有。因此,如果实验条件允许,建议使用钾盐而不是钠盐;D-荧光素游离酸在水和缓冲液中的溶解性很差,而钠盐、钾盐则可以很容易地溶解在水或缓冲液中,因此钠盐、钾盐更适合体内实验,而游离酸则需要更多的注意事项。
产品应用
报告基因分析
In vivo imaging (动物活体成像)
In vitro imaging (细胞体外分析)
ATP测定
其它luciferase及其基因相关的分析和研究工作
报告基因检测服务
双萤光素酶检测作为机制研究的利器,在研究中应用的越来越广泛,吉满提供一站式服务,助力科学研究。
1 | 根据实验目的设计实验方案 |
2 | 预测结合位点 |
3 | 构建野生/突变报告基因载体系统 |
4 | 共转染细胞 |
5 | 上机检测 |